CIENCIAS AGRARIAS Y DE LA PESCA
Premio Anual de la Academia de Ciencias de Cuba, 2020
Diversidad morfológica, genética y fitopatología del cacao (Theobroma cacao L.) tradicional cubano
Morphological and genetic diversity, and phytopathology of traditional Cuban cacao (Theobroma cacao L.)
Igor Bidot Martínez 1*
https://orcid.org/0000-0002-1262-7674
Yurelkys Fernández Maura 1
https://orcid.org/0000-0001-8803-6267
Pierre Bertin 2
https://orcid.org/0000-0001-6452-088X
Heide Marie Daniel 2
https://orcid.org/0000-0003-3057-7970
Manuel Conrado Riera Nelson 1
https://orcid.org/0000-0001-6417-3646
Marlyn Valdés de la Cruz 3
https://orcid.org/0000-0001-8153-348X
Stephan Declerck 2
https://orcid.org/0000-0002-0459-5975
Cony Decock 2
https://orcid.org/0000-0002-1908-385X
1 Universidad de Guantánamo. Guantánamo, Cuba
2
Universidad Católica de Lovaina. Louvain-la-Neuve, Bélgica
3
Universidad de La Habana. La Habana, Cuba
*Autor para la correspondencia: ibidot@cug.co.cu
RESUMEN
Introducción:
Los objetivos del trabajo fueron: Caracterizar la variabilidad morfológica
y genética del cacao tradicional cubano para clasificarlo en los grupos
tradicionales y genéticos del cultivo, Caracterizar morfológica y
molecularmente las especies de Phytophthora, causantes de la podredumbre
oscura de la mazorca en Cuba.
Métodos:
El cacao tradicional cubano se caracterizó con 33 descriptores morfológicos
cualitativos y se amplificó el ADN con los 15 microsatélites estándares
del cacao para su caracterización genética. Con el programa structure
se determinó la estructura poblacional y se clasificó en los 10 grupos
genéticos del cacao. Con estos resultados se seleccionaron las plantas
para la colección núcleo mediante el algoritmo de máxima diversidad
genética. Se estudiaron cepas de Phytophthora aisladas de frutos
enfermos, se caracterizaron morfológicamente al microscopio y se extrajo
el ADN para su análisis filogenético al amplificar la β-tubulina,
TEF1-α e ITS.
Resultados:
Se observó que las plantas cubanas tienen una alta variabilidad morfológica
y una baja variabilidad genética. Se clasificaron en siete grupos genéticos,
pero la mayoría constituyen una mezcla entre Criollo y Amelonado, lo que
indica que pertenecen al grupo tradicional Trinitario. Basado en estos resultados
se seleccionó una colección núcleo. Además, se estudiaron
un grupo de cepas de Phytophthora aisladas de frutos enfermos de Cuba,
combinando aspectos morfológicos y moleculares para identificar las especies
involucradas. Conclusiones: El cacao tradicional cubano se clasificó como
Trinitario, con potencialidades para el mejoramiento genético y las especies
de Phytophthora que afectan fundamentalmente los frutos del cacao son
P. palmivora y P. tropicalis.
Palabras clave: cacao tradicional cubano; caracterización; Phytophtora; Theobroma cacao
ABSTRACT
Introduction:
The objectives of the work were to characterize the morphological and genetic
variability of traditional Cuban cacao to classify it in the traditional and
genetic groups of the crop, To characterize morphologically and molecularly
the species of Phytophthora, causing the black pod disease in Cuba.
Methods:
Traditional Cuban cacao was characterized with 33 qualitative morphological
descriptors and DNA was amplified with the 15 cacao microsatellites standard
for its genetic characterization. With the structure program, the population
structure was determined and classified into the 10 genetic groups of cocoa.
With these results, the plants were selected for the core collection by means
of the algorithm of maximum genetic diversity. Phytophthora strains isolated
from diseased fruits were studied, morphologically characterized under the microscope
and DNA was extracted for phylogenetic analysis by amplifying β-tubulin,
TEF1-α and ITS.
Results:
It was observed that Cuban plants have high morphological variability and
low genetic variability. They were classified into seven genetic groups, but
most constitute a mix between Criollo and Amelonado, which indicates that they
belong to the traditional Trinitario group. Based on these results a core collection
was selected. In addition, a group of Phytophthora strains isolated from diseased
pods of Cuba were studied, combining morphological and molecular aspects to
identify the species involved. Conclusions: Traditional Cuban cacao was classified
as Trinitarian, with potential for genetic improvement, and the Phytophthora
species that mainly affect cacao fruits are P. palmivora and P. tropicalis.
Key words: traditional Cuban cacao; characterization; Phytophtora; Theobroma cacao
INTRODUCCIÓN
El cacao tradicional, es un recurso genético local con características morfológicas y genéticas poco conocidas. Su presencia en zonas aisladas con pocas atenciones culturales, indican que puede ser resistente a factores bióticos y abióticos del ambiente y las semillas blancas de algunas plantas son muy apreciadas en el mercado internacional. Estas son potencialidades para el mejoramiento genético de la calidad y la adaptación a las condiciones de Cuba. Las potencialidades genéticas del cultivo pueden constituir una vía para combatir la podredumbre oscura de la mazorca, pero se requiere conocer las especies que causan esta enfermedad.
Basados en lo anterior nos planteamos los objetivos: Caracterizar la variabilidad morfológica y genética del cacao tradicional cubano para clasificarlo en los grupos tradicionales y genéticos del cultivo, Caracterizar morfológica y molecularmente las especies de Phytophthora, causantes de la podredumbre oscura de la mazorca en Cuba.
Análisis morfológico del cacao tradicional cubano
En 537 plantas de cacao tradicional cubano y 105 plantas de referencia se calculó la frecuencia de 33 descriptores morfológicos cualitativos (1-3) y se clasificaron en los grupos tradicionales mediante un análisis de conglomerados con la varianza mínima de Ward.
Análisis genético mediante microsatélites
El ADN genómico de las plantas de cacao se extrajo y amplificó con los 15 pares de cebadores microsatélites (4, 5) según se describió previamente. (6) Se calculó la frecuencia y el número de alelos, alelos raros, alelos privados, (7) intervalo de tamaño de los alelos, heterocigosidad observada y esperada, contenido de información polimórfica, (8) índice de Garza-Williamson (9) y la desviación del equilibrio de Hardy-Weinberg. (10)
Con el programa structure versión 2.3.4 (11) se determinó la estructura poblacional del cacao tradicional cubano y se clasificó en los grupos genéticos al analizarlo con plantas de referencia, (12) según los parámetros previamente descritos. (6)
Selección de las plantas que integrarán la colección núcleo
Se seleccionó la colección núcleo de cacao tradicional cubano con el algoritmo de máxima diversidad genética (13, 14) implementado en el lenguaje de programación estadística R versión 3.01. (15)
Caracterización morfológica de las cepas de Phytophthora
Se tomaron 90 aislados de Phytophthora de frutos enfermos y se mantuvieron en medio agar V8 a 24-29 °C. Las características morfológicas se observaron al microscopio óptico Olympus BX50 y se fotografiaron con el programa Ulead Photo explorer SE versión 7.0.
Análisis filogenéticos de las cepas de Phytophthora
El ADN se extrajo de micelio fresco crecido en extracto de malta líquido a 25 °C en la oscuridad y se amplificó la β-tubulina, TEF1-α e ITS con el par de cebadores TUBUR1-TUBUF2,(16) ELONGF1-ELONGR1 (16, 17) y NS7-ITS4,(18) respectivamente, según se describió previamente. (19)
El análisis filogenético se realizó por el método de máxima parsimonia de PAUP* versión 4.0b10. (20) Se identificó el árbol de mayor parsimonia con búsquedas heurísticas con adición al azar de secuencia (1000), un conjunto máximo de árboles de 100, evaluado posteriormente mediante bootstrap, se retuvieron los clados compatibles con la regla de mayoría del 50 % en el árbol bootstrap consenso.
Los ITS de las secuencias de β-tubulin y TEF1-α se compararon con la base de datos de Genbank.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Análisis morfológico del cacao tradicional cubano
Se observaron 98 de las 104 clases fenotípicas de los 33 descriptores morfológicos evaluados, lo que indica una alta variabilidad morfológica del cacao tradicional cubano. Las clases fenotípicas más representativas, con frecuencia superior a 0,5, fueron:
· Del brote de la hoja: ausencia de verde.
· En la flor: flor cerrada blanca, pedúnculo violeta claro, sépalos separados, con orientación horizontal y blanco, pétalos con limbo pendiente, amarillo intenso y con ausencia de rojo, filamento mayor que la concha y el limbo, presencia de líneas de guía, estaminoides divergentes y violeta intenso y filamentos de los estambres blancos.
· Del fruto: LA relación largo por ancho mayor que dos, forma general angoleta, superficie rugosa en grado intermedio, profundidad del surco mediana, presencia de cinco grupos de dos lomos cada uno, fruto maduro amarillo, ausencia de antocianinas en el lomo y el surco del fruto inmaduro y en el lomo y el surco del fruto maduro y mesocarpio duro.
· En la semilla: pulpa blanca, sabor levemente ácido, sección transversal aplastada y violeta intenso.
La variabilidad morfológica de las plantas de cacao tradicional cubano fue similar o superior a los clones del proyecto CFC/ICCO/IPGRI, (21) accesiones del banco de germoplasma internacional de cacao, Trinidad, (22) fincas y el banco de germoplasma de Camerún. (23)
Las 68 plantas con semillas de cotiledón blanco son de interés para elaborar un chocolate fino y de excelente calidad, (24, 25) con bajas concentraciones de antocianinas y flavonoides (26) y altas concentraciones de teobromina. (27)
La caracterización morfológica por primera vez del cacao tradicional cubano es de gran importancia, más cuando se estudia fundamentalmente la variabilidad genética, y hay pocos estudios de variabilidad morfológica. (28, 29)
En el dendrograma se clasificaron 111 plantas de cacao tradicional cubano como trinitarias, 212 como forasteras y 102 como criollas, resultado relacionado con la variabilidad morfológica de los grupos tradicionales Trinitario y Forastero (30) (Fig. 1).
Las semillas blancas son típicas del grupo genético Criollo, pero el cacao tradicional cubano con esta característica no se clasificó como Criollo. Sin embargo, los cultivares tradicionales finos de aroma, con antecedentes Criollo y Forastero producen un chocolate fino (31) para mercados especializados, (31, 32) con altos precios. (33, 34)
Fig. 1. Dendrograma del cacao tradicional cubano y las plantas de referencia
de los grupos tradicionales. Elaboración propia.
Análisis genético mediante microsatélites
La suma de las frecuencias de dos alelos en todos los microsatélites fue superior a 0,8. Esta característica es típica de plantas trinitarias, (35, 36) por las hibridaciones e introgresiones en Trinidad de Criollo antiguo y Amelonado homocigóticas, (37, 38) lo que indica que el cacao tradicional cubano es Trinitario.
Se observaron 139 alelos por microsatélite, con media de 9,267 alelos por locus. Los alelos raros fueron 104, con una media por locus de 6,933 (Tabla 1).
Tabla 1. Variabilidad genética de los 15 microsatélites evaluados en el cacao tradicional cubano. Elaboración propia
Microsatélite |
Alelos |
Alelos raros |
Alelos privados |
Intervalo de tamaño (pb) |
Ho |
He |
Equilibrio de Hardy-Weinberg (p) |
PIC |
Índice de Garza-Williamson (M) |
mTcCIR1 |
6 |
4 |
2 |
129-141 |
0,404 |
0,418 |
0,031 |
0,337 |
0,500 |
mTcCIR6 |
9 |
7 |
2 |
227-251 |
0,335 |
0,363 |
0,369 |
0,341 |
0,375 |
mTcCIR7 |
6 |
3 |
1 |
149-161 |
0,238 |
0,300 |
0,076 |
0,279 |
0,500 |
mTcCIR8 |
11 |
9 |
4 |
284-306 |
0,270 |
0,292 |
0,096 |
0,263 |
0,500 |
mTcCIR11 |
8 |
6 |
0 |
290-316 |
0,364 |
0,399 |
0,000 |
0,361 |
0,346 |
mTcCIR12 |
10 |
8 |
2 |
177-252 |
0,440 |
0,425 |
1,000 |
0,375 |
0,133 |
mTcCIR15 |
10 |
8 |
1 |
234-258 |
0,449 |
0,526 |
0,003 |
0,463 |
0,417 |
mTcCIR18 |
7 |
5 |
0 |
332-356 |
0,387 |
0,441 |
0,015 |
0,392 |
0,292 |
mTcCIR22 |
9 |
7 |
4 |
275-296 |
0,318 |
0,376 |
0,017 |
0,330 |
0,429 |
mTcCIR24 |
6 |
4 |
0 |
186-202 |
0,181 |
0,182 |
1,000 |
0,169 |
0,375 |
mTcCIR26 |
7 |
5 |
2 |
285-305 |
0,248 |
0,346 |
0,003 |
0,319 |
0,400 |
mTcCIR33 |
17 |
14 |
5 |
273-345 |
0,380 |
0,486 |
0,001 |
0,467 |
0,250 |
mTcCIR37 |
12 |
9 |
0 |
135-175 |
0,394 |
0,495 |
0,045 |
0,470 |
0,325 |
mTcCIR40 |
11 |
8 |
1 |
262-286 |
0,481 |
0,644 |
0,283 |
0,578 |
0,500 |
mTcCIR60 |
10 |
7 |
2 |
188-214 |
0,660 |
0,597 |
0,194 |
0,535 |
0,423 |
Total |
139 |
104 |
26 |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
Media |
9,267 |
6,933 |
1,733 |
- |
0,370 |
0,419 |
- |
0,379 |
0,384 |
Desv. est. |
2,816 |
2,620 |
1,526 |
- |
0,113 |
0,116 |
- |
0,105 |
0,101 |
pb: pares de bases, Ho: Heterocigosidad observada, He: Heterocigosidad esperada, PIC: Contenido de Información Polimórfica, Desv. est. Desviación estándar
El número de alelos del cacao tradicional cubano fue superior al observado
en Bolivia, (39) Ecuador, (40) Nicaragua (33)
y República Dominicana (41) e inferior a bancos de germoplasma
como la colección alto amazónica,(42) África Occidental
(43) y CATIE (44). Además, los alelos privados y
raros indican información genética típica o exclusiva, potencialmente
útil para el mejoramiento genético. (45)
La heterocigosidad observada varió entre 0,181 y 0,660 y la esperada entre 0,182 y 0,644. Estos resultados fueron superiores a plantaciones de Criollo en México (0,28), (46) pero inferiores a plantaciones de la costa ecuatoriana, República Dominicana y bancos de germoplasma en Costa Rica, Perú, Puerto Rico y Ghana (0,460-0,717). (47-50)
La media de la heterocigosidad esperada en el cacao tradicional cubano fue inferior a la observada en plantaciones de la costa ecuatoriana, Amazonas, Perú, República Dominicana, Nicaragua y Criollo en México (0,476 y 0,74). (33, 41, 46, 51-53)
Ocho de los microsatélites no estaban en equilibrio de Hardy-Weinberg, con déficit de heterocigotos. Resultados similares se observaron en cacao Criollo en México, (46) Refractario en Ecuador,(40) en el Amazonas brasileño, (52) Ecuador (40) y el cacao Nacional boliviano. (53)
El bajo valor de la heterocigosidad observada, esperada y el déficit de heterocigóticos indican baja variabilidad genética, debida a la alta frecuencia de dos alelos por locus y la endogamia, favorecida por sus poblaciones reducidas y aisladas. (54, 55)
El Índice de Garza-Williamson fue inferior a 0,68; límite por debajo del cual se considera una reducción reciente en el tamaño poblacional. (9) Este resultado confirma la historia del cultivo en Cuba, introducido por Cabaiguán (1540) y expandido por la zona central que concentró el 90 % del cacao durante el siglo XVIII. Posteriormente (1791-1803) se introdujo por Ti Arriba desde Haití, se expandió por la región oriental y disminuyó en el centro. (56)
Se observaron dos grupos en el cacao tradicional cubano. La media del coeficiente de pertenencia de cada planta a su grupo fue de 0,952. En el grupo 1 se observaron 419 plantas y 118 en el grupo 2. (Fig. 2a).
Los grupos genéticos más frecuentes del cacao tradicional cubano fueron Amelonado (61,64 %) y Criollo (27,37 %). Las plantas restantes se clasificaron en los grupos Marañón (5,40 %), Iquitos (2,23 %), Contamana (1,49 %), Nanay (1,12 %) y Nacional (0,75 %) (Fig. 2b).
En el grupo 1 (asociado con la región oriental), el 96,90 % de las plantas se clasificaron en los grupos genéticos Amelonado y Criollo, lo que indique que son Trinitarias. Esta puede ser una evidencia de la introducción a Cuba en 1791-1803, cuando se cultivaba el Forastero y Trinitario. El 3,10 % restante pertenece al grupo Marañón.
En el grupo 2 (asociado con la región central) las plantas se clasificaron en siete grupos genéticos: Criollo (35,59 %), Amelonado (25,42 %), Marañón (13,56 %), Iquitos (10,17 %), Contamana (6,78 %), Nanay (5,09 %) y Nacional (3,39 %), lo que indica una mayor variabilidad genética. El 35,59 % de las plantas del grupo 2 se clasificaron en el grupo Criollo, evidencia de la introducción en 1540, cuando se cultivaba cacao Criollo. (38, 56)
Los grupos genéticos del cacao tradicional cubano coincidieron con los de República Dominicana: Amelonado (61,64 % y 72,10 %), Criollo (27,37 % y 9,50 %), y los grupos Marañón, Iquitos, Contamana, Nanay y Nacional con menos del 20 %. (41) Como el origen del cacao en República Dominicana y Haití es el mismo, es evidencia de la introducción a Cuba desde Haití. (38)
Fig. 2. Análisis basado en los 15 microsatélites del
cacao tradicional cubano con el programa structure, modelo ancestral
admixture. Arriba: Estructura poblacional. Debajo: Clasificación
genética comparando con controles. Elaboración propia.
Selección de las plantas que integrarán la colección núcleo
Se seleccionaron 185 plantas para la colección núcleo, que se está constituyendo en Baracoa. Esta colección núcleo se utilizará en el mejoramiento genético del cacao, en especial para incrementar la calidad. Las colecciones núcleo disminuyen los costos de conservación y facilitan el mejoramiento genético. (57, 58)
Caracterización morfológica de las cepas de Phytophthora
En el medio V8, 88 cepas cubanas presentaron un patrón de crecimiento petaloide. La producción de esporangios fue abundante, con formas ovoides a elipsoidal, pedicelio ≤ 4 µm de longitud, 38 µm-60 µm de longitud y 27 µm-40 µm de ancho. El radio L/A (largo/ancho) varió de 1,25 a 1,92. Se observaron las clamidosporas, con diámetro de 32,5 µm -43,5 µm. Estas características morfológicas corresponden a las observadas en Phytophthora palmivora. (59, 60)
En dos aislados cubanos (CU58 y PHYTO40) y en los aislados de la Guyana Francesa, los esporangios midieron 37 µm-50 µm de longitud y 22 µm -32 µm de ancho, con un radio L/A de 1,8 a 2,4. Se observó una larga hifa de 50 µm. Según estas características las cepas pertenecen al complejo Phytophthora capsici-Phytophthora tropicalis (61).
Análisis filogenéticos de las cepas de Phytophthora
Se identificaron dos especies de Phytophthora en Cuba:P. palmivora y P. tropicalis, dos en la Guyana Francesa:P. tropicalis / capsici complex y una potencial nueva Phytophthora sp. En Cuba P. palmivora fue la especie dominante y en la Guyana francesa fue P. tropicalis / capsici complex.
Las cepas de P. palmivora tuvieron un alto grado de similaridad ( Figura 3).
A
B
Fig. 3.Árbol filogenético de las cepas cubanas de Phytophthora
inferido por análisis de máxima parsimonia. A. basado en las secuencias
de la región ITS, B. basado en las secuencias del factor de elongación
1-α. Elaboración
propia.
En los árboles filogenéticos de la región ITS y el gen TEF1-
α se observó un máximo de 5 bp entre los 700 pares de bases de
longitud de la región ITS, lo que corresponde a una proporción de
sitios variables de alrededor de 0,01. La región TEF1-α de 1000 pares
de bases de longitud fue más variable, con un máximo de 20 bp diferentes
y una proporción de sitios variables de 0,02 bp.
Para el complejo Phytophthora tropicalis / capsici se contó con 865 bp, de los cuales 67 fueron informativos para la parsimonia. El análisis resultó en 981 árboles más parsimoniosos (MPT) (140 steps in length, CI = 0,771; RI = 0,904), de las 1000 búsquedas heurísticas. Se seleccionaron dos topologías concurrentes para las cepas de la Guyana Francesa (Fig. 4) que forman un clado bien soportado.
A
B
Fig. 4. Árbol filogenético que muestra las cepas cubanas
de Phytophthora basado en las secuencias del gen β-tubulina, inferido
por análisis de máxima parsimonia. a. Topología más frecuente.
b. Topología menos frecuente. Elaboración propia.
En los árboles filogenéticos y en todas las secuencias utilizadas (ITS, β-tubulina), los aislados de Cuba (CU58, PHYTO40) tentativamente identificados como complejo P. tropicalis / capsici se agruparon en el clado P. tropicalis s.s. Este clado contiene a la cepa tipo de P. tropicalis (CBS434.91), cepas de varios orígenes y varios hospederos. Las cepas cubanas difieren de P. tropicalis (type ) en 4 bp a 5 bp, 6 bp a 7 bp, 3 bp a 5 bp, en ITS y β-tubulina, respectivamente.
Los aislados de la Guyana Francesa tentativamente identificados como P. capsici (62) se ubicaron en dos diferentes linajes según sus diferencias morfológicas.
El primer clado comprende 7 cepas mientras el segundo clado contiene una cepa (Reg 2-4). El linaje Reg 2-4 fue en todas las filogenias, distantemente relacionado con P. tropicalis y P. capsici. Las otras 7 cepas forman un clado bien soportado en los tres análisis filogenéticos (linaje Guyana).
En las inferencias filogenéticas basadas en β-tubulina, el linaje de Guyana formó un clado bien soportado (Bootstrap 100) que se ubicó en una posición aislada, pero sus afinidades no están resueltas. Se observaron topologías concurrentes del análisis individual de cada gen. En su topología dominante (Figura 4a), el clado de Guyana se asoció al clado de P. tropicalis (type). En la topología menos frecuente (Figura 4b), este clado se asoció a P. capsici.
Conclusiones
La alta variabilidad morfológica y la baja variabilidad genética del cacao tradicional cubano es el resultado de su evolución a partir de plantas introducidas en Cuba con antecedentes de siete grupos genéticos y sus híbridos, con una estrecha base genética como resultado de un cuello de botella.
La clasificación del cacao tradicional cubano en el grupo Trinitario basado en su variabilidad morfológica y genética, le atribuye potencialidades para su empleo en el mejoramiento genético del cacao comercial presente en Cuba.
El algoritmo de máxima diversidad genética permitió seleccionar las plantas más representativas de la variabilidad morfológica y genética del cacao tradicional cubano, las que se proponen como colección núcleo para su conservación ex situ.
Dos especies de Phytophthora afectan los frutos de cacao en Cuba:Phytophthora palmivora, predominante en las muestras, y Phytophthora tropicalis, la cual se observó en una frecuencia muy baja.
Agradecimientos
A los investigadores y técnicos del Instituto de Investigaciones Agroforestales UCTB Baracoa, en especial a Pablo Clapé Borges, Yannolis Matos Cueto y Wilfredo Lambert Lobaina.
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Recibido: 04/06/2021
Aprobado:
15/08/2021
Conflicto de intereses. Los autores declaran que no tienen conflicto de intereses relacionados con la investigación.
Contribución de autoría
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Conceptualización: Igor Bidot Martínez, Yurelkys Fernández Maura, Pierre Bertin, Heide-Marie Daniel, Manuel Conrado Riera Nelson, Marlyn Valdés de la Cruz, Stephan Declerck, Cony Decock, Pablo Clapé Borges, Yannolis Matos Cueto, Wilfredo Lambert Lobaina
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Curación de datos: Igor Bidot Martínez, Yurelkys Fernández Maura
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Análisis formal: Igor Bidot Martínez, Yurelkys Fernández Maura, Pierre Bertin, Heide-Marie Daniel, Manuel Conrado Riera Nelson, Marlyn Valdés de la Cruz, Stephan Declerck, Cony Decock
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Adquisición de fondos: Igor Bidot Martínez, Yurelkys Fernández Maura, Pierre Bertin, Heide-Marie Daniel, Manuel Conrado Riera Nelson
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Investigación: Igor Bidot Martínez, Yurelkys Fernández Maura, Pierre Bertin, Heide-Marie Daniel, Manuel Conrado Riera Nelson, Marlyn Valdés de la Cruz, Stephan Declerck, Cony Decock, Pablo Clapé Borges, Yannolis Matos Cueto, Wilfredo Lambert Lobaina
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Metodología: Igor Bidot Martínez, Yurelkys Fernández Maura, Pierre Bertin, Heide-Marie Daniel, Manuel Conrado Riera Nelson, Marlyn Valdés de la Cruz, Stephan Declerck, Cony Decock
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Administración del proyecto: Igor Bidot Martínez, Yurelkys Fernández Maura, Pierre Bertin, Manuel Conrado Riera Nelson, Pablo Clapé Borges
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Recursos: Igor Bidot Martínez, Yurelkys Fernández Maura, Pierre Bertin, Manuel Conrado Riera Nelson
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Software: Igor Bidot Martínez, Yurelkys Fernández Maura
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Supervisión: Pierre Bertin, Heide-Marie Daniel, Manuel Conrado Riera Nelson, Marlyn Valdés de la Cruz, Stephan Declerck, Cony Decock
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Validación: Igor Bidot Martínez, Yurelkys Fernández Maura, Pierre Bertin, Heide-Marie Daniel, Manuel Conrado Riera Nelson, Marlyn Valdés de la Cruz, Stephan Declerck, Cony Decock
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Visualización: Igor Bidot Martínez, Yurelkys Fernández Maura, Pierre Bertin, Heide-Marie Daniel, Manuel Conrado Riera Nelson, Marlyn Valdés de la Cruz, Stephan Declerck, Cony Decock
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Redacción-borrador original: Igor Bidot Martínez, Yurelkys Fernández Maura, Pierre Bertin, Heide-Marie Daniel, Manuel Conrado Riera Nelson, Marlyn Valdés de la Cruz, Stephan Declerck, Cony Decock, Pablo Clapé Borges, Yannolis Matos Cueto, Wilfredo Lambert Lobaina
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Redacción-revisión y edición: Igor Bidot Martínez, Yurelkys Fernández Maura, Pierre Bertin, Heide-Marie Daniel, Manuel Conrado Riera Nelson, Marlyn Valdés de la Cruz, Stephan Declerck, Cony Decock, Pablo Clapé Borges, Yannolis Matos Cueto, Wilfredo Lambert Lobaina
Financiación. La investigación estuvo financiada por la Cooperación Universitaria para el Desarrollo (CUD), actualmente ARES-CCD.
Copyright (c) 2021 Igor MartÃnez Bidot MartÃnez, Yurelkys Fernández Maura, Pierre Bertin, Heide-Marie Daniel, Manuel Conrado Riera Nelson, Stephan Declerck, Cony Decock
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